2009年春节联欢晚会23日18时进行了最后一次联排，同时也录制了备播带。这次联排所有的演员，包括港台歌手都到达现场。周杰伦与宋祖英的“英伦配”正式彩排了《本草纲目mix辣妹子》，虽然周董的鼓敲得略有瑕疵，但整体效果非常好，连导演都称赞。

　　以下是节目单（以1月23日最后一次彩排、录备播带出场顺序排序）：

　　2009央视春晚节目单（最新）

　　1.开场歌舞 《中华大联欢》：粉色丝带从天而降，花裙少女其中蹁跹，舞台背景亮出“牛”字

　　2.民俗歌舞 《新年好》表演者：林依轮、解小东、孙悦、吕薇

　　3.相声 《我有点晕》表演者：姜昆、戴志强

　　4.多媒体舞蹈 《城市变奏曲》 表演者：天津芭蕾舞团

　　5.相声 《团团圆圆》表演者：李伟健、武宾(内地)，刘增锴、樊光耀(台湾)，董卿。运往台湾的大熊猫需要饲养员，考官董卿测试四位笑星，各展绝活抖包袱。

　　6.歌舞 《森林舞会》 表演者：黄圣依

　　7.歌曲 《本草纲目》表演者：宋祖英、周杰伦

　　8.歌曲 《送你一朵东方茉莉》表演者：宋祖英

　　9.小品 《吉祥三宝》 表演者：孙涛等

　　10.现代舞蹈 《蝶恋花》 表演者：天津芭蕾舞团

　　11.相声 《五官新说》 表演者：马东、刘伟、大山等

　　12.滑稽歌舞 《功夫世家》 表演者：塔沟武术学校学员、陈国坤等。不再是传统武术演绎方法，生活化的表现幽默感十足。

　　13.歌舞 《天地吉祥》 表演者：四川民族歌舞团

　　14.歌曲 《超越梦想》；表演者；星光大道歌手、吕继宏、王宏伟

　　15.小品 《黄豆黄》 表演者：黄宏、黄晓娟、巩汉林

　　16.歌曲 《站起来》 演唱者：成龙、陈奕迅、容祖儿、谭晶

　　17.小品 《水下除夕夜》表演者：金洋、尚大庆等

　　18.歌曲 《天之大》 演唱者：毛阿敏

　　19.小品 《北京欢迎你》表演者：郭达、蔡明等。蔡明演的老太太快比上宋丹丹了，整个作品趣味横生。

　　20.大拜年 50多位奥运健儿集体出场大拜年

　　21.歌曲 《祖国颂》表演者：张也

　　22.踢踏舞 《大河之舞》片段；表演者：爱尔兰国家舞蹈团

　　23.相声剧 《暖冬》 表演者：冯巩、金玉婷

　　24.杂技 《抖杠》

　　25.近景魔术 《金玉满堂》 表演者：刘谦（台湾）

　　26.歌舞 《山乡春来早》

　　27.小品 《不差钱》表演者：赵本山、毕福剑、小沈阳、毛毛。老赵这次将舞台很大程度上“让”给了徒弟。

　　28.歌曲联唱 《天地人和》表演者：蔡国庆、蒋大为等

　　29.大拜年 杨利伟、费俊龙等航天员拜年

　　30.合唱 《神州共举杯》表演者：戴玉强、王莉、王莹

　　31.零点 倒计时敲钟

　　32.舞蹈 《中华大团圆》

　　33.歌曲联唱 《中国之最》

　　34.戏曲 《锦绣梨园 》

　　35.歌曲串烧 李宗盛、罗大佑、周华健、张震岳

　　36.“改革开放三十年纪念金曲”环节：《年轻的朋友来相会》、《长江之歌》、《东方之珠》等歌曲联唱。

　　37.谢幕歌曲 《难忘今宵》